实验内容

康生1号戒毒口服液戒毒药效学和急性毒性试验

目的:初步观察康生1号戒毒口服液对大白鼠和小白鼠吗啡依赖性戒断症状的影晌。

方法：给大白鼠和小白鼠用剂量递增法，皮下注射七天，形成吗啡依赖模型。动物分为吗啡依赖性病模对照组（简称病模组）、病模+康生1号戒毒口服液高、中、低（含生药75g/kg、37.5 g/kg和18.75g/kg，分别相当于临床用量的5倍、2.5倍和1.25倍）三个剂量组和病模+可乐定阳性对照组，并设一个不造模的正常对照组.共计6组。造模第5天开始，同时灌胃给药，每天二次，连续三天。第八天，各组动物均腹腔注射纳络酮催瘾，记录动物的戒断症状（大白鼠给纳络酮催瘾后按戒断症状评分和称体重计算失重；小白鼠则计算纳络酮催瘾后跳跃次数/10分钟）。用SPSS（10.0）方差分析组间差异的显著性。

结果:康生1号戒毒三个剂量组，均能明显的减轻大白鼠戒断症状评分，但对小白鼠催瘾后的跳跃次数/10分钟无明显影响。大白鼠急性毒灌胃一日耐受大于50ml（含生药142.5g）·kg-1 。

结论：康生1号戒毒口服液灌胃给药，三个剂量均能明显的抑制大白鼠吗啡成瘾的戒断症状 。该药大白鼠灌胃给药的急性毒性很小。

当今社会上吸毒现象日趋严重，吸毒中仍以对片类（吗啡、海洛英等）成瘾者居多，国内外普遍采用美沙酮替代疗法，但由于美沙酮本身是麻醉性成瘾药物，且有一定毒副作用，是其不足。

近年来，我国的广大医药科研人员，就中药戒毒药进行了许多探索和开发，并已有了一些中药戒毒药用于戒毒，也显露出一定的效果，但尚缺乏有突破性药物出现。

康生1号戒毒口服液是临床试用效果良好的戒毒药，福建省泉州洲际生物工程有限公司拟于开发的中药戒毒药，我们按药品研究的要求，对该样品进行了戒毒作用的初步药效学试验和急性毒性试验，现将试验结果报告如下：

一、康生1号对吗啡成瘾大白鼠戒断症状的影响:

（一）、实验目的：初步观察康生1号戒毒口服液对吗啡成瘾大白鼠戒断症状的影响。

（二）、实验材料：

1、实验动物：大白鼠，SD品系，雄性，160~170g,上海斯克莱实验动物责任公司提供，合格证：0003288。

2、测试药品：康生1号戒毒口服液，流浸膏，含生药4．278 g/ml, 实验时用蒸馏水配成所需的浓度。福建省泉州市洲际生物工程有限公司提供。批号：040419。

3、其它试剂：

（1）、盐酸吗啡注射液，10mg/1ml,沈阳制药厂生产，批号 20010406。

（2）、盐酸纳络酮（粉），100mg/支，Sigma公司出品。

（3）、盐酸可乐定片，0.075mg/片,丹阳市药业责任公司，批号 20040304。 

（三）、试验方法：

1、大白鼠吗啡依赖性模型的建立： 试验用大白鼠50只, 雄性，160~170g, 分8只为一组，共6组，除正常对照组外，其余5组，给皮下注射（sc）盐酸吗啡，每日二次(8:00am:6:00pm)，首日剂量为20mg/kg，以后每日递增20mg/kg，至第5天，盐酸吗啡剂量达100mg/kg, 以该剂量维持2天，以形成大白鼠吗啡依赖性模型。正常对照组用生理盐水皮下注射对照。

2、分组和剂量：试验设正常对照组、吗啡依赖性病模组（简称病模组）、病模+康生1号戒毒口服液高、中、低三个剂量组和病模+可乐定阳性对照组，共计6组。造模第5天开始灌胃给药，康生1号戒毒口服液三个剂量分别为每日生药75.0g/kg、37.5 g/kg和18.75g/kg(分别相当于临床用量的5倍、2.5倍和1.25倍) ，分二次灌胃给药，灌胃容量为1ml/100g bw. 正常对照组和病模组给等量常水灌胃对照。可乐定阳性对照组,仅在给纳络酮催瘾测定时，腹腔注射（ip）给药一次。

3、催瘾试验和药效观察：除正常对照组外，各组动物均于第8天上午再给皮下注射（sc）盐酸吗啡100mg/kg一次，2小时后灌胃给药一次，给药后1小时，称重，各组动物腹腔注射（ip）盐酸纳络酮5mg/kg.bw催瘾。观察记录各项戒断症状，并按柳田知司记分法评分：异常姿势2分。高度激惹、触碰激惹2分、靠近激惹1分。咬牙，间断性0.5分、连续性1分。以上行为每15分钟评一次，共4次。流泪4分。软便4分、不成形8分。流涎轻度1分、明显2分。以上植物神经系统症状60分钟内评分一次，计算每鼠总累积分。同时称量催促戒断后1、24、48、72和96小时大白鼠体重，与催瘾前体重比较，计算其体重丧失情况。数据用表示，SPSS（10.0）方差分析，检验组间差异的显著性。

（四）、结果：

实验结果证明，给大白鼠皮下注射吗啡，造成吗啡依赖性病模后，动物体重明显减轻。给盐酸纳络酮5mg/kg.bw腹腔注射（ip）催瘾，注射1~2分钟后，动物开始出现异常姿势、激惹、咬牙、流涎和腹泻等戒断症状。给康生1号戒毒口服液三个剂量组动物的戒断症状明显较轻。（结果见表1~1和表1~2）

表1~1康生1号对吗啡成瘾大白鼠戒断症状的影晌（n=8,）

与正常对照组比较，P〈0.01；与病模组比较，* P〉0.05、 *** P〈0.01。

表1~2  催瘾后各组大白鼠体重变化比较（n=8,）

与正常对照组比较，P〉0.05 、P〈0.01；与病模组比较，*P〉0.05，** P〈0.05。

（五）、讨论与小结：

用大鼠催促戒断症状评分方法，来评价针对阿片类戒毒药的疗效作用，仍是目前国内外常用的评定方法。

本实验用递增法，给大白鼠皮下注射（sc）盐酸吗啡七天，造成吗啡依赖性模型，动物呈现出懒散、毛松、食欲下降和体重减轻等症状。给动物腹腔注射（ip）盐酸纳络酮5mg/kg.bw催瘾后，动物开始出现异常姿势、激惹、咬牙、流涎和腹泻等戒断症状，伴有体重明显减轻。给康生1号戒毒口服液灌胃的三个剂量组，动物戒断症状明显减轻，其中，康生1号戒毒口服液18.75g/kg/天×3天剂量组的作用尤其明显，与可乐定阳性对照组作用相似，且能减轻体重的下降。          

实验结果也表明，剂量大小与药效强度关系不明显。原因尚需进一步实验查明。

二、康生1号对吗啡成瘾小白鼠戒断症状的影响：

（一）、实验目的：观察康生1号对吗啡成瘾小白鼠戒断症状的影响。

（二）、实验材料：

1、实验动物：小白鼠，昆明种，雄性，18~22g,福建医科大学动物实验中心供应。

2、测验药样：康生1号戒毒口服液，流浸膏，含生药4．278 g/ml, 实验时用蒸馏水配成所需的浓度。福建省泉州市洲际生物工程有限公司提供。批号：040419。

3、其它试剂：

（1）、盐酸吗啡注射液，10mg/1ml,沈阳制药厂生产，批号 20010406。

（2）、盐酸纳络酮注射液，0﹒4mg/ml,益侨（湖南）制药有限公司生产，批号 20010102。

（3）、盐酸可乐定片，0.075mg/片,丹阳市药业责任公司，批号 20040304。

（三）、试验方法：

1、小白鼠吗啡依赖性模型的建立： 试验用小白60 只，雄性，18~20g, 分10只为一组，共6组，除正常对照组外，其余5组，给皮下注射（sc）盐酸吗啡，每日二次(8:00am:6:00pm)，从50mg/kg开始每日递增10mg,至第6天达到100mg/kg,维持此剂量，继续给药至第8天上午再给药1次后，进行催瘾试验。

2、分组和剂量：试验设正常对照组、吗啡依赖病模组（简称病模组）、病模+康生1号戒毒口服液高、中、低三个剂量组和病模+可乐定阳性对照组，共计6组。造模第5天开始灌胃给药，康生1号戒毒口服液三个剂量分别为生药75g、37.5 g和18.75g(相当于临床用量的5倍、2.5倍和1.25倍) ，分二次灌胃给药，灌胃容量为0.3ml/10g bw. 正常对照组和病模组给等量常水灌胃对照。可乐定阳性对照组,仅在给纳络酮催瘾测定时腹腔注射（ip）给药一次。

3、验和药效观察：除正常对照组外，各组动物均于第8天上午再给皮下注射（sc）盐酸吗啡100mg/kg一次，2小时后灌胃给药一次，给药后1小时，称重，各组腹腔注射（ip）盐酸纳络酮5mg/kg.bw催瘾,立即将小白鼠放入一个直径750px,高875px的玻璃圆筒内，观察10min内小白鼠跳跃反应，记录跳跃动物数、计算每组跳跃百分率（每组跳跃动物数/每组测定动物数）和跳跃次数/10min。数据用表示，SPSS 10.0检验组间差异的显著性。

(四)、结果：

表2~1 康生1号对吗啡成瘾小白鼠戒断症状的影晌（n=10,）

　　与正常对照组比较， P〈0.01；与病模组比较，* P〉0.05。

（五）、讨论与小结：

实验结果证明，吗啡依赖性病模组小鼠，给盐酸纳络酮5mg/kg.bw腹腔注射（ip）催瘾后，正常对照组小鼠无跳跃反应，而吗啡依赖性病模组小鼠，跳跃反应为百分之一百，表明小鼠吗啡依赖性病理模型造模成功。可乐定（0.015mg/kg,ip）阳性对照组小鼠跳跃次数/10min比病模组明显减少，抑制率为39.2%、P〈0.05，而给康生1号戒毒口服液三个剂量组催瘾后，小鼠跳跃次数/10min与病模对照组比较虽有减少，但差异无统计学显著意义。

三、康生1号戒毒口服液急性毒性试验（耐受量、 MTD测定）

（一）、试验目的：康生1号戒毒口服液经预试，其灌胃给药的毒性小，无法测出LD50，改做一日耐受量（MTD）测定，以反应该药的毒性。

（二）、试验材料：

1、实验动物：大白鼠，SD品种，240~270g，雄性，40只，上海斯克莱实验动物责任公司提供，合格证：0003288。

2、试验药品：，康生1号戒毒口服液，流浸膏，含生药4．278 g/ml,福建省泉州洲际生物工程有限公司提供。批号：040419。实验时用蒸馏水配制成可通过灌胃器灌胃给药的浓度（合生药2.85g/ml）。

（三）、实验方法：

经预试，康生1号戒毒口服液毒性小，一次灌胃给药无法测定LD50，改做一日耐受量（MTD）测定。

正式试验用白鼠40只，SD品种，雄性，体重240~270g。实验前禁食给水16小时，称重，分20只/组，一组为给药组，按高剂量：即给药物大浓度（生药2.85g/ml），大容积（2.5ml/100g . bw）灌胃给药，每6小时1次，连续2次。另一组为正常对照组，给常水2.5ml/100g . bw灌胃对照。观察给药后动物的中毒症状和7天内的死亡情况。

（四）、实验结果：

给药后约10分钟，大白鼠出现喜卧少动、行走缓慢的情况，持续2～3小时，4～5小时后出现褐色溏便（与药物颜色相似），污染肛周和尾部。被毛较松，呼吸较慢，肤色稍暗，鼻、眼、口腔无异常分泌物，无抽搐，光反射正常，第2次给药后上述症状更为明显。第2天动物全部恢愎正常，7天内未见动物中毒死亡，1周后称重，给药组大白鼠体重增重37.4±16.0g，正常对照组增重36.6±8.8g，二组动物体重增长属正常范围。

（五）、小结：

实验结果证明，给大白鼠灌胃（ig）康生1号戒毒口服液高剂量：即药物的浓度（生药2.85g/ml），容积（2.5ml/100g . bw），一日二次，动物出现中枢神经糸统的镇静作用，溏便等反应，第2天动物全部恢愎正常，7天内未见动物中毒死亡，体重增长正常，计算出一日耐受量大于50ml（含生药142.5g）·kg-1。表明康生1号戒毒口服液的急性毒性小。